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?最近做實驗不順利，經(jīng)常得不到目標蛋白，要么就是蛋白損失很大。怎么辦呢？
由于超濾管使用不恰當或是超濾知識缺乏引起的問題，簡直成了實驗汪們蛋白實驗不成功、效率低下的最常見原因之一。比如說：
為什么我截留分子量選擇沒錯，蛋白有時候卻會漏出在濾出液中？
為什么我用濃縮后的蛋白做下游分析的時候發(fā)現(xiàn)有干擾？
用超濾管來分離兩種蛋白可以嗎？
有時候我用超濾離心管連水都離不下來，可能的原因是？
超濾管可以用來脫鹽和濃縮核酸嗎？
如何給超濾管滅菌？
于是，膜過濾和超濾專家專門寫了一篇攻略，幫助實驗小白們成功在通往技術(shù)大牛的道路上打怪升級。
廢話不多說，上干貨，小板凳搬好了哦！
我們先來看看重點問題怎么解決
Q
為什么我截留分子量選擇沒錯，
蛋白有時候卻會漏出在濾出液中？
A
導(dǎo)致漏蛋白甚至檢測不到蛋白的原因很復(fù)雜，應(yīng)優(yōu)先根據(jù)樣品調(diào)整工藝，因為同一種膜、截留分子量和裝置組合對于不同的蛋白質(zhì)類別甚至物種而言可能并非最優(yōu)之選。
在選擇過程中，應(yīng)首先執(zhí)行以下步驟：
考慮樣品和分子特性：比如改變pH 可能增加構(gòu)象改變的風險，而降低溫度可能降低濃縮效率等。
選擇正確的膜：眾所周知，超濾沒有太多的膜選項，但您應(yīng)對再生纖維素（RC）、Hydrosart? 和聚醚砜（PES）材料進行測試，以確定哪種材料可為您的特定材料提供最低的非特異性結(jié)合和最優(yōu)的回收率。
選擇合適的截留分子量，通常是靶標1/3大小的截留分子量最適合。但有時則需要更小的孔徑來滿足回收率的要求。如果在病毒和核酸樣品，可參看下面截留分子量和病毒顆粒分子大小以及核酸大小的換算表。
選擇合適的裝置：賽多利斯擁有適用于低濃度樣品、DNA、蛋白質(zhì)、病毒、過濾應(yīng)用等廣泛的裝置選項；選擇合適的裝置可以有效改善結(jié)果。
使用合適的裝置處理方法：例如預(yù)沖洗以去除分析物或用非干擾蛋白沖洗以鈍化結(jié)合位點并減少損失。
考慮樣品控制方法，例如使用裝置內(nèi)的“死體積”移走所有截留物，或預(yù)灌裝濾液管以控制截留物的最終體積。
截留分子量和病毒顆粒分子大小以及核酸大小的換算表
Q
為什么我用濃縮后的蛋白
做下游分析的時候發(fā)現(xiàn)有干擾？
A
超過濾薄膜含有微量甘油和疊氮化鈉。如果此材料干擾分析，可用緩沖液或去離子水預(yù)清洗。如果干擾仍然存在，用 0.1 N NaOH 清洗，然后用緩沖液或去離子水再次清洗后甩干。如果必須用NaOH處理的時候，推薦試用聚醚砜（PES）膜，因為比（再生纖維素）RC膜更耐NaOH，同時提醒NaOH不能過夜浸泡。
Q
用超濾管來分離兩種蛋白可以嗎？
A
因為超濾膜的孔徑不是規(guī)則的結(jié)構(gòu)，所以不能進行精確的分離，所以按照經(jīng)驗，我們推薦兩個蛋白的分子量要相差一個數(shù)量級（10倍）以上才可以進行分離。另外，賽多利斯獨有的300k，1000k和0.2um的超濾管可以實現(xiàn)10倍以上分子量差異的蛋白粗分離。
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